培養步驟:
一.培養基及培養凍存條件準備:
1)準備MEM培養基(MEM:GIBCO,貨號11095-080),85%;北美胎牛血清(United States,GIBCO,貨號16000-044),15%。
2)培養條件: 氣相:空氣,95%;二氧化碳,5%。 溫度:37攝氏度,培養箱濕度為70%-80%。
3)凍存液:90%*培養基,10%DMSO,現用現配。液氮儲存。
二.細胞處理:
1)復蘇細胞:將含有1mL細胞懸液的凍存管在37℃水浴中迅速搖晃解凍,加入4mL培養基混合均勻。在1000RPM條件下離心4分鐘,棄去上清液,補加1-2mL培養基后吹勻。然后將所有細胞懸液加入培養瓶中培養過(guò)夜(或將細胞懸液加入10cm皿中,加入約8ml培養基,培養過(guò)夜)。第二天換液并檢查細胞密度。
2)細胞傳代:如果細胞密度達80%-90%,即可進(jìn)行傳代培養。
對于貼壁細胞,傳代可參考以下方法:
1.棄去培養上清,用不含鈣、鎂離子的PBS潤洗細胞1-2次。
2.加2ml消化液(0.25%Trypsin-0.53mM EDTA)于培養瓶中,置于37℃培養箱中消化1-2分鐘,然后在顯微鏡下觀(guān)察細胞消化情況,若細胞大部分變圓并脫落,迅速拿回操作臺,輕敲幾下培養瓶后加少量培養基終止消化。
3.按6-8ml/瓶補加培養基,輕輕打勻后吸出,在1000RPM條件下離心4分鐘,棄去上清液,補加1-2mL培養液后吹勻。
4.將細胞懸液按1:2到1:5的比例分到新的含8ml培養基的新皿中或者瓶中。
3)細胞凍存:待細胞生長(cháng)狀態(tài)良好時(shí),可進(jìn)行細胞凍存。貼壁細胞凍存時(shí),棄去培養基后加入少量胰酶,細胞變圓脫落后,加入約1ml含血清的培養基后加入凍存管中,再添加10%DMSO后進(jìn)行凍存。
描述:(1)公司可提供新鮮或凍存細胞株;(2)細胞株數量約 5×105/瓶;(3)不含有HIV-1、HBV、HCV、支原體、細菌、酵母和真菌。
發(fā)貨:客戶(hù)可根據自身科研項目的需要選擇不同類(lèi)型的細胞培養瓶和相應的細胞密度。發(fā)貨的新鮮細胞還包含:1、發(fā)貨的T25方瓶中裝滿(mǎn)50ml左右*培養基;2、說(shuō)明書(shū)及注意事項;3、公司售后服務(wù)標準。
保存和應用:客戶(hù)可以根據自己的需求選擇新鮮或者凍存的原代細胞,如是新鮮細胞株,客戶(hù)收到細胞后應立即將其放入CO2細胞培養箱內靜置后2-3h,再進(jìn)行后續的實(shí)驗操作。如是凍存細胞,客戶(hù)收到細胞后應立即將其放入液氮、-80℃冰箱或立即進(jìn)行復蘇。該細胞只可用于科研,不得用于臨床應用。
產(chǎn)品名稱(chēng) | RAW 264.7小鼠單核巨噬細胞白血病細胞 |
規格 | 5×105/瓶 |
貨號 | CS-X3225 |
細胞分類(lèi):
一種:
是凍存產(chǎn)品,由氮直液接拿出,干冰運輸給客戶(hù)。一般不推薦這種,也較少使用這種方式,因為復蘇手法對于細胞狀態(tài)影響較大,一旦細胞狀態(tài)不好,很難說(shuō)是細胞自身不行,還是復蘇沒(méi)操作好;另外溫度對細胞、基因功能狀態(tài)影響很大,也不是細胞儲存的方式,快遞時(shí)間也很難控制,多種因素影響產(chǎn)品的質(zhì)量;干冰運輸需要額外添加400元的運費(順豐)。
第二種:
是我們復蘇好細胞,QC通過(guò)后,T-25灌滿(mǎn)培養基常溫運輸給客戶(hù),排除復蘇造成影響,常溫運輸也對細胞影響也不大,只需加25元運費(順豐)。
質(zhì)量保證:我們的細胞株來(lái)源于A(yíng)TCC、ECACC、DSMZ、JCRB等,購買(mǎi)到貨后,由我們實(shí)驗室擴增、凍存,凍存的產(chǎn)品全部經(jīng)過(guò)QC檢測,100%進(jìn)口來(lái)源,100%保證5代以?xún)?,活?gt;95%,無(wú)細菌、真菌、支原體污染。
細胞培養的優(yōu)點(diǎn):
1.研究的對象是活細胞
在實(shí)驗過(guò)程中,根據要求可始終保持細胞活力,并可長(cháng)時(shí)間監控、檢測甚至定量評估一部分活細胞的情況,包括活細胞的形態(tài)、結構、生命活動(dòng)等。
2.研究條件可以人為控制
pH、溫度、氧氣、二氧化碳、張力等物理化學(xué)的條件,可以根據實(shí)際需要進(jìn)行人為的控制,同時(shí),可以施加化學(xué)、物理、生物等因素作為條件而進(jìn)行實(shí)驗觀(guān)察,這些因素同樣可以處于嚴格控制之下。
3.研究的樣本可以達到比較均一性
通過(guò)細胞培養一定代數后,所得到的細胞系則可以達到均一性而屬于同一類(lèi)型的細胞,需要時(shí),可采用克隆化等方法使細胞達到純化。
4.研究?jì)热荼阌谟^(guān)察、檢測和記錄
采用各種研究技術(shù):如倒置生物顯微鏡、熒光顯微鏡、電子顯微鏡、流式細胞術(shù)、激光共焦顯微鏡、免疫組織化學(xué)、原位雜交、同位素標記等各種儀器設備。
以下是公司正在熱銷(xiāo)的相關(guān)產(chǎn)品:
9.375pg/ml 單增李斯特菌(LM)核檢測試盒(熒光-PCR法)(Ser4,Ile8)-Oxytocin,Isotocin
4.688pg/ml蠟樣芽孢桿菌(BC)核檢測試盒(熒光-PCR法)(Thr4,Gly7)-Oxytocin
9.375pg/ml A 族鏈球菌(GAS)核檢測試盒(熒光-PCR法)Abu-Gly
18.75pg/ml麻風(fēng)桿菌(ML)核檢測試盒(熒光-PCR法)γ -Glu-Abu
9.375pg/ml 空腸彎曲菌(CJ)核檢測試盒(熒光-PCR法)γ -Glu-Gly-Gly
9.375pg/ml 幽門(mén)螺旋桿菌(HP)核檢測試盒(熒光-PCR法)Ophthalmic Acid
18.75pg/ml乳桿菌(LB)核檢測試盒(熒光-PCR法)BIBP3226
18.75pg/ml胎兒彎曲菌(CF)核檢測試盒(熒光-PCR法)Neuropeptide Y (human,rat)
0.188ng/ml結核桿菌(TB)核檢測試盒(熒光-PCR法)Biotinyl-Neuropeptide Y(human, rat)
0.094ng/ml腦膜炎奈瑟菌通用型(NM-U)核檢測試盒(熒光-PCR法)Neuropeptide Y (freeacid) (human, rat)
RAW 264.7小鼠單核巨噬細胞白血病細胞人B細胞生長(cháng)因子(BCGF)ELISA試盒 烯酯
人B細胞生長(cháng)因子(BCGF)ELISA試盒 4-苯酯
人B細胞分化因子(BCDF)ELISA試盒 對苯酯
人B細胞分化因子(BCDF)ELISA試盒 三氯酰酯
人上皮細胞粘附分子(Ep-CAM/CD362)ELISA試盒 戊酯
人上皮細胞粘附分子(Ep-CAM/CD362)ELISA試盒 硬脂酯
人可溶性粘附分子(Sam)ELISA試盒 硬脂酯
人可溶性粘附分子(Sam)ELISA試盒 油膽甾醇酯
人巨噬細胞替代激活相關(guān)化學(xué)因子1(AmAC-1)ELISA試盒油酯
人巨噬細胞替代激活相關(guān)化學(xué)因子1(AmAC-1)ELISA試盒原三酯
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