定量PCR檢測試劑盒常用于熒光免疫法中標記抗原或抗體，亦可用于微環(huán)境，如表面活性劑膠束、雙分子膜、蛋白質(zhì)活性位點(diǎn)等處微觀(guān)特性的探測。通常要求探針的摩爾吸光系數大，熒光量子產(chǎn)率高；熒光發(fā)射波長(cháng)處于長(cháng)波且有較大的斯托克斯位移；用于免疫分析時(shí)，與抗原或抗體的結合不應影響它們的活性。
 

　　定量PCR檢測試劑盒實(shí)驗方法：
 

　　1.取增菌液1ml加到l.5ml無(wú)菌離心管中，10，000rpm離心5min，棄去上清；加入50ulDNA提取液，充分混勻后沸水浴5min，13000rpm離心5min，取上清液進(jìn)行檢測或保存于-20C以待檢測。
 

　　2.將PCR反應液置室溫平衡，融化后取Taq酶，按2U/管加入Taq酶，即每個(gè)測試反應體系配制為：PCR反應液22.5ul+0.4u1Taq酶。
 

　　3.加入模板：將保存在-20C的核酸提取物置室溫解凍，以13000rpm離心5min。陰、陽(yáng)性對照使用前置室溫解凍。在每個(gè)PCR反應管中分別加入步驟1中處理過(guò)的模板或陰、陽(yáng)性對照各2u1，蓋好管蓋，置于PCR儀上，記錄相應樣品號。
 

　　4.上機擴增、檢測區：反應條件為95C：3min，1個(gè)循環(huán)；95C：5sec，60C：40sec(信號采集)，40個(gè)循環(huán)。反應體系設為25u1。對于多通道熒光PCR儀，信號采集時(shí)設定為Fam熒光素。
 

　　定量PCR檢測試劑盒使用注意事項：
 

　　1.本試劑盒僅用于體外檢測和研究用途，開(kāi)始使用前請仔細閱讀本說(shuō)明書(shū)全文。
 

　　2.實(shí)驗必須嚴格分區操作：PCR前準備區一一準備實(shí)驗試劑；樣本處理區一一待測樣本、模板處理；檢測區一一PCR擴增、檢測。
 

　　3.有關(guān)實(shí)驗室管理規范請參照國家相關(guān)部門(mén)頒布的基因擴增實(shí)驗室的管理規范執行。