PCR擴增試劑盒是從克隆有ThermuaquaticusDNAPolymerase基因的大腸桿菌經(jīng)誘導表達后，再經(jīng)三次過(guò)柱純化分離出來(lái)的一個(gè)約94KD的重組蛋白。無(wú)外源核酸酶和細菌DNA污染，穩定性好，特異性強，適用于各種PCR擴增。本試劑盒已經(jīng)包括了PCR擴增使用的各種試劑，便于客戶(hù)配套使用。使用本制品擴增得到的PCR產(chǎn)物的3'端附有一個(gè)A堿基，因此可直接克隆于T-Vector中。

　　所謂多重PCR（MultiplexPolymeraseChainReaction，mPCR），也稱(chēng)復合PCR，由Chambehian'在1988年提出（Chambehian'et.al.NucleicAcidsRes.1988Dec9;16(23):11141–11156.），基本原理與常規PCR相同，區別在于多重PCR的反應體系是加入多對引物，各對引物分別結合在模板的相應位置，擴增出多條DNA片段。

　　PCR擴增試劑盒實(shí)驗注意事項：

　　1.進(jìn)行PCR反應前，可以將所有g(shù)DNA的濃度稀釋到同一濃度，并轉移到PCR8聯(lián)管中，一方面是便于排槍操作，另一方面是加入相同起始量的gDNA，這樣可以降低文庫的濃度差異，便于混合文庫。

　　2.大多數情況下引物是1管，操作相當方便；當目標區域是外顯子或者是其他連續區域時(shí)，我們會(huì )把引物分裝為2管，分別命名PrimerpoolT1與PrimerpoolT2，這時(shí)需要第二輪PCR前把產(chǎn)物合并，再進(jìn)行下一步反應。

　　3.執行多重PCR反應時(shí)，特別是樣本量多的情況下，可以將T1設為一組，T2設為一組，便于制備反應試劑混合液和排槍操作；并把解凍好的試劑放置在冰盒上，在冰盒上進(jìn)行加樣操作。

　　4.在實(shí)驗中，可以在PCR管壁上和管蓋上同時(shí)進(jìn)行反應編號標記，防止高溫或其他原因導致記號消失，避免后續產(chǎn)物混合操作失誤，造成樣本交叉污染。

　　5.第二輪PCR后，因為YFBufferB試劑比較粘稠，在清洗純化的時(shí)候不能吸走所有試劑，可以剩余5-10μl，否則會(huì )把磁珠一起吸走，造成樣品的損失，導致產(chǎn)物回收率下降。